Кръстосани тестове: какви са те, техника и основа, фази

Кръстосаните тестове са серия от лабораторни изследвания, които се провеждат, за да се определи дали кръвните продукти от донор (главно цяла кръв и кълбовиден концентрат) са съвместими с кръвта на реципиента.

Това е допълнителен тест в допълнение към ABO съвместимостта и Rh фактора. Причината за кръстосано тестване е, че понякога две индивиди (донор-реципиент) могат да имат една и съща група ABO и Rh, но кръвта им все още е несъвместима.

Такава несъвместимост се дължи на наличието на антитела срещу серия от протеини от червени кръвни клетки, известни като малки антигени. Тези антигени не се оценяват рутинно, както се прави с кръвна група (ABO) и Rh фактор.

Това е така, защото второстепенните антигени са много по-рядко срещани и имат променлива експресия във всеки индивид, поради което е почти невъзможно да се групират в категории, както се прави с групата и Rh фактора.

Вместо това, червените кръвни клетки на донорите се смесват със серума на пациента (тест за основна съвместимост) и червените кръвни клетки на пациента с донорен серум (тест за незначителна съвместимост), за да се открие наличието на реакции антиген-антитяло.

Когато има антитела срещу малки антигени, или в серума на пациента или на донора, тестът се казва, че е положителен, така че в повечето случаи тази конкретна единица кръв не може да бъде прелята.

ABO Group

За да се разбере добре, че кръстосаните реакции се третират първо, е необходимо да се познават основите на кръвните групи.

В този смисъл най-важното е да се знае, че кръвта може да се класифицира в четири групи: A, B, AB и O.

Всяка от тези групи експресира върху повърхността на червените кръвни клетки определен протеин (антиген), който се идентифицира като чужд елемент от антителата на потенциален рецептор на различна група.

Най-впечатляващите реакции на антиген-антитяло в кръвната съвместимост е, че не е необходимо предварително излагане на антигена за наличие на антитела. Това е известно като естествени антитела.

Естествени антитела

Обикновено, за да съществуват антитела в тялото на индивида, е необходимо белите кръвни клетки да са били изложени преди това на антигена.

Това означава, че при първия контакт между чуждия антиген и организма няма антитела, тъй като те се генерират по-късно, след първоначалния контакт. Поради това е невъзможно имунната система да има антитела срещу, например, конкретен вирус, ако не е била изложена на него в миналото.

Единственото изключение от горното е анти-АВ антигените. В тези случаи лицето има антитела срещу антигена, които червените им кръвни клетки нямат, дори ако никога не са били в контакт с червените кръвни клетки на друго лице. Това е известно като естествени антитела.

Антигени и антитела, свързани с кръвната група

Кръвните групи се определят в случая на ABO системата чрез наличието на специфични антигени (А или В) в мембраната на червените кръвни клетки и, обратно, антитела срещу антигена, липсващи в еритроцитната мембрана.

Така човек с кръвна група А изразява антиген А на повърхността на техните червени кръвни клетки, докато в серума има анти-В антитела.

Напротив, при пациенти от група В се открива антиген В, докато антителата са анти-А.

Сега пациентите с АВ кръв имат А и В антигени, затова няма антитела, тъй като това би унищожило червените кръвни клетки на лицето.

Обратното се случва в група О, където еритроцитната мембрана не представя нито един от двата антигена (нито А, нито В), докато в серума има анти-А и анти-В антитела.

Несъвместимост на групата ABO

От гореизложеното, съвместимостта на кръвните групи ABO може лесно да бъде изведена, тъй като антигенът на еритроцитната мембрана е автоматично познат антитела в серума. По този начин:

- Кръв А е съвместим с група А и група О.

- Кръвна група В е съвместима с кръвта В и О.

- Хората с група О могат да получават само кръв О (тъй като имат анти-А и анти-В антитела), въпреки че кръвта им се получава от всички други групи без проблеми, тъй като липсват антигени.

- Накрая. Тези, които имат кръвна група АВ, могат да получат кръв от всички други групи (А, В, О и разбира се АБ), тъй като те нямат антитела срещу някой от антигените. Обаче само АБ могат да приемат АВ кръв, тъй като всички други групи имат антитела, които биха унищожили тези червени кръвни клетки.

Незначителни антигени

Както и при групите ABO, серия от протеини, които функционират като антигени, могат да бъдат намерени на повърхността на еритроцитите, какъвто е случаят с антигените от групата на АВО.

Въпреки това, тези антигени не се срещат при всички индивиди. Неговата комбинация е хетерогенна и пенетрантността (нивото на експресия на протеина) е променлива, поради което е невъзможно да се класифицира в групи като тази, която съществува за ABO и Rh. Оттук идва името си от "малки антигени", известни също като "антигени с ниска честота".

Въпреки че те не са чести, може да има естествени антитела срещу малки антигени. Сред тях най-често срещани са Люис, MNSs, анти N, Kell, Duffy, анти Fyb и Kidd. Всички те са отговорни за много сериозни хемолитични и посттрансфузионни реакции.

В допълнение, може да има случаи на сенсибилизация срещу малки антигени чрез предишен контакт, или с споменатите антигенни протеини, дължащи се на предишни трансфузии или поради кръстосан имунитет.

Кръстосан имунитет

Казва се, че има кръстосан имунитет, когато два антигена от два различни източника (например червена кръвна клетка и бактерия) са много сходни, до степен, че антителата срещу един от споменатите антигенни протеини също реагират с другия, защото те са почти идентични.,

За да го разберете по-добре, вземете предишния хипотетичен пример (антигени на червени кръвни клетки и бактерии). В нито един от случаите не съществуват естествени антитела, но ако човек е изложен на бактериите, те ще генерират антитела срещу него.

Такива антитела ще реагират по-късно срещу червените кръвни клетки, ако антигените от този вид са много сходни с тези на бактериите, които индуцират образуването на антителата.

Ако това се случи, червените кръвни клетки с този специфичен антигенен протеин не могат да бъдат приложени на лицето, което има антитела, тъй като ще има отхвърляне. Тук се крие значението на кръстосаните реакции.

За какво са кръстосаните тестове?

Тъй като е невъзможно да се характеризира кръвта на различни индивиди в групи на базата на второстепенните антигени, единственият начин да се знае дали в кръвта на човек има антитела срещу второстепенните антигени на червените кръвни клетки на другия е чрез кръстосани тестове.,

В случаите, когато антителата присъстват, се задейства хемолиза или реакция на аглутинация, така че се прави заключението, че реакцията е положителна; има антитела срещу малки антигени (въпреки че не е известно точно какво). В противен случай тестът е отрицателен.

фундамент

Кръстосаните тестове се основават на реакцията антиген-антитяло. Следователно, с тях е възможно да се открие дали в серума на рецептор има антитела срещу антигените на червените кръвни клетки на донора (или обратно), индуциращи реакция антиген-антитяло.

Ако няма антитела, няма реакция и тестът се отчита като отрицателен. Обратно, ако реакцията е положителна (има хемолиза или аглутинация по време на теста), може да се заключи, че антителата присъстват.

Във връзка с това е важно да се отбележи, че може да има антитела срещу червени кръвни клетки както в донорния, така и в реципиентния серум. Това е причината да има два вида кръстосани реакции.

Видове кръстосани реакции

Възможно е в серума на пациента да има антитела срещу донорни еритроцити; но обратното също може да е вярно, тоест, антитела в серума на донора срещу червените кръвни клетки на пациента.

Ето защо има два вида кръстосани тестове:

- По-голямо кръстосано изпитване.

- Незначително кръстосано изпитване.

И двата вида се извършват рутинно в кръвната банка преди трансфузирането на кръвни продукти, като се има предвид, че ако някой от тестовете е положителен, съществува висок риск от трансфузионни реакции, които могат да застрашат живота на пациента.

По-голям кръстосан тест

В този тест се оценява дали има антитела срещу червените кръвни клетки на донора в серума на реципиента.

Ако това се случи, кръвните продукти не могат да бъдат администрирани, тъй като голям брой анти-тела, намиращи се в плазмата на пациента, много бързо ще унищожат червените кръвни клетки на донора, генерирайки катастрофални реакции в тялото на реципиента в процеса. Тези реакции са толкова тежки, че могат да застрашат живота ви.

Незначителен кръвен тест

В този случай се определя дали има антитела в донорния серум срещу червените кръвни клетки на реципиента.

Ако е така, антителата ще започнат да унищожават еритроцитите на рецептора. Обаче, тъй като количеството на антителата е ограничено, реакцията е с по-малка интензивност; въпреки че все още е опасно.

фази

Както големите, така и малките кръстосани тестове са разделени на три фази:

- Салина.

- Термично или инкубационно.

- Кумс.

В първата фаза, червените кръвни клетки и серумът се смесват във физиологичен разтвор. След това се добавя албумин и пробата се инкубира при 37 ° С в продължение на 30 минути, за да се завърши накрая с коумсовата фаза.

техниката

Техниката на кръстосано тестване е сравнително проста, тъй като включва добавяне на червени кръвни клетки на донора към серума на пациента (основен кръстосан тест), както и еритроцити на реципиента към серума на донора (малък кръстосан тест).

За да се индуцира реакцията антиген-антитяло за относително кратко време, трябва да се следва серия от стандартизирани стъпки. Тези стъпки са обобщени по опростен начин по-долу.

Важно е да се има предвид, че в следващия раздел е описан по-големият тест за съвместимост, въпреки че стъпките са същите за теста за незначителна съвместимост, но обменят произхода на червените кръвни клетки и серума.

Солеви фази

- Към епруветката се добавят 2 капки серум от реципиента (от донора, ако е незначителен кръстосан тест).

- Вземете проба от донорските червени кръвни клетки (от получателя, ако е незначителен кръвен тест).

- Измийте и центрофугирайте червените кръвни клетки.

- Ресуспендирайте в разтвор между 3% и 5%.

- Поставете капка от този разтвор в епруветката, съдържаща серума на реципиента.

- Разбъркайте внимателно.

- Центрофуга.

- Прочетете резултата в лампата на дисплея.

Термична фаза

- Добавете 2 капки от 22% албумин в епруветката, където е завършила солната фаза.

- Инкубирайте при 37 ° С в продължение на 30 минути.

- Центрофугирайте за 15 секунди.

- Прочетете резултата в лампата на дисплея.

Фаза на Coombs

- Вземете клетките от епруветката и ги измийте с физиологичен разтвор.

- Отстранете супернатантата.

- Добавете две капки реактив на Coombs.

- Разбъркайте внимателно.

- Центрофугирайте от 15 до 30 секунди.

- Ресуспендирайте клетките и оценете в лампата за визуализация в търсене на аглутинация или хемолиза.

Ако в някоя от фазите има аглутинация или хемолиза, резултатът се счита за положителен.