Malonato бульон: основа, подготовка и употреба

Малонатният бульон е течната културална среда, използвана за диагностичния тест (малонатови тест), използвана за диференциране на някои родове от семейството Enterobacteriaceae. Той е създаден от Leifson през 1933 г. и впоследствие е модифициран от Ewing, който е добавил малко количество декстроза и екстракт от дрожди към оригиналната формула.

Понастоящем средата се състои от дрождев екстракт, амониев сулфат, дикалиев фосфат, монокалиев фосфат, натриев хлорид, натриев малонат, декстроза и бромтимолово синьо. Този тест обикновено е включен в биохимичната идентификационна батерия за ентеробактерии, като помага да се разграничат определени родове и видове.

Малонатният тест се основава главно на способността на някои микроорганизми да използват натриев малонат като единствен източник на въглерод и амониев сулфат като източник на азот.

Малонатният тест обикновено е положителен при някои видове от родовете Enterobacter, Klebsiella и Citrobacter. Докато по-голямата част от видовете от родовете Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus и Providence, дават отрицателна реакция.

фундамент

Малонатният тест се състои в демонстриране на бактериите, които са способни да използват натриев малонат като единствен източник на въглерод и амониев сулфат като източник на азот.

По-голямата част от ентеробактериите, които не използват малонат, могат да растат в тази среда, като приемат декстроза и дрождев екстракт като хранителни вещества.

В този случай всеки опит за алкализиране чрез използване на пептоните ще бъде противодействан от производството на киселини, генерирани от ферментацията на декстрозата. По същия начин, дикалиев и монокалиев фосфат действат като буфер, поддържащ рН при 6.7.

Ето защо, когато тестът е отрицателен, бульонът е със същия оригинален цвят (зелен). В редки случаи средата може да бъде подкиселена поради ферментацията на декстроза; без използването на пептоните и рН индикаторът ще превърне цвета на средата в жълто. За да стане това, рН трябва да спадне до 6.

Сега, когато този тест е положителен, се казва, че микроорганизмът използва малонат и амониев сулфат като въглеродни и азотни източници, съответно, без да използва другите компоненти.

В този случай, средата става алкална поради освобождаването на натрий и последващото образуване на NaOH. В този смисъл рН индикаторът (бромтимолово синьо) превръща цвета от зелен в син, когато рН е равно или по-голямо от 7.6. Синьото може да е ясно или силно (пруско синьо).

Накрая, натриевият хлорид поддържа осмоларността на средата и водата е разредител на всички компоненти.

интерпретация

Бульон със същия цвят (зелен): отрицателен тест

Жълт бульон: отрицателен тест

Светлосин или интензивен бульон: положително доказателство

Има вариант, наречен фенилаланинов малонов бульон, наричан още Шоу и Кларк среда. В този случай могат да бъдат анализирани два теста, използването на малонат като въглероден източник и производството на пирувинова киселина от фенилаланин.

подготовка

Малонатов бульон

Количеството грамове, посочено от вмъкването на избраната търговска къща, се претегля (може да варира от една до друга). Тежките грамове се суспендират в един литър дестилирана вода. Леко се нагрява до пълно разтваряне. Разпределете 3 ml от средата в 13/100 епруветки с памучен капак.

Стерилизира се в автоклав при 121 ° С за 15 или 20 минути.

Охлажда се преди употреба. Ако няма да се използва веднага, съхранявайте в хладилник до употреба. Подсушете бульоните при стайна температура, преди да ги инокулирате.

РН на средата трябва да бъде 6.7 ± 0.2. Цветът на подготвената среда е зелено.

Фенилаланинов малонат бульон

Претеглят се 11 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Останалата част от препарата е същата като описаната по-горе.

Той може също да бъде приготвен чрез добавяне на 2 gr / L фенилаланин към средата на малоновата хранителна среда, преди да бъде стерилизирана.

употреба

Той се използва като част от батерията от биохимични тестове, които се събират за идентифициране на бактерии от семейството Enterobacteriaceae.

Помощ за разграничаване между:

- Род Klebsiella и Enterobacter (+) от рода Escherichia и Serratia (-).

Видовете Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame и Salmonella enterica ssp diarizonae (+), от вида Salmonella enterica ssp enterica (-).

-От рода Klebsiella като цяло (+) от рода Actinobacillus (-).

- Понякога може да помогне за диференциацията на родовете и видовете бактерии, които не принадлежат към семейство Enterobacteriaceae, като например между не ферментиращите Грам отрицателни бацили Alcaligenes faecalis (+) и Acinetobacter sp (-).

процес

Под запалка се взема част от чиста колония, като се използва платинена дръжка, подходящо стерилизирана и охладена. Взетата проба (лек инокулум) се разтваря в малонатния бульон. Инкубира се с хлабав капак при аеробиоза при 35 ° С ± 0, 2 за 24 до 48 часа.

Малонатният бульон може също да бъде инокулиран от култура от 18-24 часа в триптиказен соев бульон. В този случай, 0, 01 ml се взимат със стерилна пипета и малонатният бульон се инокулира. Инкубира се с хлабав капак при аеробиоза при 35 ° С ± 0, 2 за 24 до 48 часа.

В края на времето резултатите се интерпретират. Всички следи от син цвят, завършили след 48 часа инкубация, трябва да се считат за положителни. Тестът не трябва да се тълкува като отрицателен, докато инкубационното време от 48 часа не е завършено.

В случай на използване на варианта на фенилаланинов малонатен бульон, малонатът първо се интерпретира и след това се добавят 5 капки 1N HCL и 3-5 капки ферихлорид 8%. Тъмнозелен цвят се интерпретира като положителен тест за фенилаланин. Ако, от друга страна, средата стане бледо синя, тестът е отрицателен за фенилаланин.

Контрол на качеството

За да се извърши контролът на стерилността на средата, един или два бульона трябва да се инкубират при 35 ° С ± 0.2 за 24 часа инкубация. В края на това време не трябва да има мътност, промяна на цвета.

За контрол на качеството могат да се използват известни или сертифицирани щамове като: Enterobacter aerogenes АТСС 13048, Klebsiella pneumoniae АТСС 33945, Salmonella enterica ssp arizonae АТСС 13314 и Escherichia coli ATCC 25922.

Очакваните резултати са:

Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae и Salmonella enterica ssp arizonae дават положителна реакция (средно син цвят).
За Escherichia coli резултатът трябва да бъде отрицателен, т.е. очаква се, че няма промяна в цвета (зелен) или че става жълт поради ферментацията на глюкоза.